Ключ. слова: chaperon, dyshormonal breast diseases, breast cancer
Індекс рубрикатора НБУВ: Р569.133.1-45

Рубрики:

Пухлини молочних (грудних) залоз

Шифр НБУВ: Ж14160 Пошук видання у каталогах НБУВ 

С помощью метода двугибридной системы дрожжей идентифицированы новые партнеры фосфатазы PTEN. Сконструированные байт-конструкты, содержащие C-концевой участок, дикую, мутантную активированную и неактивную dead-формы, проверены в тестах на экспрессию, проникновение в ядро и самоактивацию с использованием стандартного протокола Duplex A системы. Выполнен двугибридный скрининг кДНК библиотек рака кишечника, HeLa и эмбриона мыши с последующим отбором позитивных клонов с помощью метода полового слияния. Последовательности идентифицированы с помощью сиквенс-анализа и поиска гомологии в базах данных. Скрининг кДНК библиотек с помощью полноразмерной формы PTEN и его C-концевого домена позволил отобрать 43 положительных клона, подтвержденных методом полового слияния. Анализ последовательностей выявил, что два из них кодируют AEBP1 (Adipocyte Enhancer Binding Protein 1). Согласно данным, взаимодействие между PTEN и AEBP1 опосредовано их C-концевым и N-концевым участками соответственно. Функциональное значение PTEN-AEBP1 взаимодействия изучается.

Экспрессирована рекомбинантная S6K2 в бакуловирусной системе. Выделены препаративные количества гомогенного белка для биохимических исследований. Получены и охарактеризованы специфические моноклональные антитела против рекомбинантной S6K2. Изучены экспрессия и внутриклеточная локализация S6K1 и K2 в злокачественных и доброкачественных опухолях молочной железы по сравнению с аналогичными нормальными тканями. Рекомбинантный бакуловирусный вектор, экспрессирующий S6K2 дикого типа, создан с помощью Bac-to-Bac системы (Invitrogen); рекомбинантная S6K2 очищена из инфицированных Sf9 клеток с помощью метода афинной хроматографии. Получены моноклональные антитела против рекомбинантной S6K2. Специфичность полученных антител в реакции с рекомбинантной и эндогенной S6K2 изучена с помощью методов ELISA, Вестерн-блоттинга, иммунопреципитации и иммуногистохимического окрашивания. Для иммуногистохимического определения S6K1 и S6K2 в нормальных и опухолевых тканях молочной железы использовали моноклональные антитела против S6K1 и К2. Препаративные количества ферментативно активной S6K2 получали с использованием бакуловирусной экспрессирующей системы. Для получения и характеристики моноклональных антител применяли высокогомогенные препараты S6K2. В опухолях молочной железы выявлен повышенный уровень экспрессии S6K1 и S6K2 по сравнению с таковым в аналогичных нормальных тканях. S6K2 часто локализовалась в ядрах аденокарцином, но редко в фиброаденомах и нормальных тканях молочной железы. Сделан вывод, что получение препаративных количеств рекомбинантной S6K2 и

создание специфических моноклональных антител к S6K2 - эффективный способ изучения функции и регуляции этой важной сигнальной молекулы в нормальных и опухолевых клетках. Иммуногистохимический анализ экспрессии S6K1 и K2 в нормальных тканях и злокачественных опухолях молочной железы подтверждает их повышенную экспрессию в последних. Накопление S6K2 в ядрах раковых клеток может быть связано с нарушением ядерно-цитоплазматических перемещений, а следовательно, может нарушать клеточный рост и пролиферацию.

Отмечено, что функциональное состояние клетки контролируется сетью сигнальных каскадов, опосредованных белками, позволяющих клеткам взаимодействовать друг с другом и реагировать на внеклеточные сигналы. К таким белкам относится фосфоинозитид-3-киназа (PI3K), существующая в виде различных изоформ и участвующая в модификации фосфолипидов. Последние включаются как вторичные мессенджеры в сигнальные каскады, регулирующие рост, пролиферацию и дифференцировку клеток, перестройку цитоскелета, обмен веществ, везикулярный транспорт, перенос веществ через мембраны и апоптоз. Нарушения регуляции сигнальных каскадов приводят к дисрегуляции клеточного цикла, изменению подвижности и адгезивности клеток, индукции ангиогенеза и ингибированию апоптоза. Участие PI3K и продуктов ее активности в указанных процессах свидетельствует о ее роли при различных патологических состояниях человека, в том числе онкологических.

Отмечено, что в настоящее время для выявления опухолеассоциированных антигенов применяются методы клонирования эпитопов для Т-клеток с целью выявления мишеней клеточного иммунного ответа, а также серологический анализ кДНК-экспрессирующих библиотек (SEREX) для обнаружения антител гуморального иммунного ответа. Для определения опухолевых антигенов, вызывающих появление антител в сыворотке крови пациентов с опухолью толстой кишки, применен метод SEREX. Идентифицированы пять различных антигенов, иммунореактивных по отношению к аутологичной сыворотке и обозначенных KY-CC-1-3, -21, -22. Гетерологичный иммуноскрининг указанных антигенов с использованием набора сывороток здоровых доноров и пациентов с опухолями пищеварительного тракта продемонстрировал, что антиген KY-CC-3/COX1, который, по данным литературы, ассоциирован с развитием тиреоидита Хашимото, может представлять опухолеассоциированный антиген. Данные свидетельствуют о том, что применение в серологическом анализе капельного метода нанесения бактериофага является оптимальным для стандартизации процедуры гетерологичного иммуноскрининга, представляющего наиболее критический этап в SEREX-методологии. Обсуждены трудности и возможные пути повышения эффективности SEREX-анализа при раке толстой кишки.

Проанализированы экспрессия и особенности локализации S6K в аденомах и аденокарциномах молочной железы человека и в нормальных тканях молочной железы. Уровень экспрессии и локализация S6K проанализированы в гистологических срезах нормальной ткани молочной железы человека, аденом и аденокарцином разной степени дифференцировки, предварительно фиксированных формалином и заключенных в парафин. Иммуногистохимическую детекцию S6K1 и S6K2 в эпителиальных клетках молочной железы осуществляли с помощью специфических моноклональных и поликлональных антител к S6K1 и S6K2 с последующим полуколичественным анализом данных. Обнаружено повышенное содержание S6K в цитоплазме опухолевых клеток эпителиального происхождения доброкачественных и злокачественных опухолей молочной железы по сравнению с эпителиальными клетками нормальной ткани. В аденокарциномах выявлено накопление в ядрах опухолевых клеток S6K1 и в большей степени S6K2. В 80 % аденокарцином молочной железы детектировано ядерное окрашивание S6K2 по сравнению с нормальными тканями. В 31 % случаев почти в 50 % опухолевых клеток наблюдалось сильное окрашивание ядер. Ядерная локализация S6K1 в опухолевых клетках установлена в 25 % аденокарцином. В эпителиальных клетках нормальной ткани молочной железы ядерная локализация S6K не обнаружена. Сделан вывод, что иммуногистохимический анализ свидетельствует о гиперэкспрессии обеих форм S6K (S6K1 и S6K2) в опухолях молочной железы человека. Полуколичественный анализ особенностей локализации S6K в эпителиоцитах молочной железы свидетельствует о высоком содержании S6K (особенно S6K2) в нуклеоплазме, что является характерной особенностью

опухолевых клеток.

Ключ. слова: S6K1, S6K2, S6 protein, expression, immunohistochemistry, endometrial adenocarcinoma
Індекс рубрикатора НБУВ: Р569.714.1-43

Рубрики:

Пухлини матки

Шифр НБУВ: Ж14160 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Мета: клонувати, експресувати у бакуловірусній системі (БВС) та очистити пухлинний антиген SSX2 та використати його для скринінгу сироватки крові здорових донорів та хворих на меланому. Матеріали та методи: використано БВС експресії, метод афінної хроматографії на Ni-NTA агарозі, імуноферментний аналіз для скринінгу сироватки крові хворих на меланому (n = 29) та здорових донорів (n = 27). Результати: з використанням БВС експресії клоновано та експресовано рекомбінантний антиген SSX2; SSX2 був очищений методом афінної хроматографії та використаний як антиген для ELISA. Порівнювальний аналіз сироваток крові хворих на меланому та здорових донорів виявив більш високий рівень SSX2 в сироватках хворих на меланому у порівнянні з таким у здорових донорів. Висновки: SSX2 антиген, експресований у БВС, можна застосовувати для серологічного аналізу сироватки крові онкологічних хворих.

Ключ. слова: tuberous sclerosis, TSC1/2, yeast two-hybrid system, protein-protein interactions
Індекс рубрикатора НБУВ: Р56-29

Рубрики:

Онкологія

Шифр НБУВ: Ж14160 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Індекс рубрикатора НБУВ: Р569.715.2-4

Рубрики:

Пухлини яєчників

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Індекс рубрикатора НБУВ: Е60*550*72 + Е60*725.111.46

Рубрики:

Загальна зоологія

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Індекс рубрикатора НБУВ: Е60*725.111.46 + Е623.36*72

Рубрики:

Загальна зоологія

Mammalia Ссавці. Теріологія

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Індекс рубрикатора НБУВ: Е70*725.111.3

Рубрики:

Біологія людини

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Індекс рубрикатора НБУВ: Е0*725.111.42

Рубрики:

Загальна біологія

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Індекс рубрикатора НБУВ: Р569.452-2

Рубрики:

Пухлини щитоподібної залози

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Індекс рубрикатора НБУВ: Е0*725.111.3*04

Рубрики:

Загальна біологія

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Індекс рубрикатора НБУВ: Е0*445.4 + Р56-2

Рубрики:

Загальна біологія

Онкологія

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Індекс рубрикатора НБУВ: Е0*725.111.4*041 + Е0*725.111.3

Рубрики:

Загальна біологія

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

In this study we describe the identification of sodium-dependent phosphate transporter NaPi2b as MX35 cancer-associated antigen. To achieve this goal we have screened extensively a cDNA expressing library from ovarian cancer cell line OVCAR3 with monoclonal antibody MX35. To further confirm the authenticity of this finding, we showed that bacterially and baculovirally expressed NaPi2b is specifically recognized by MX35 antibody. Moreover, the validity of these results was verified in a parallel study involving affinity purification and mass spectrometry. The epitope for MX35 monoclonal antibody was mapped to the largest extracellular loop of NaPi2b. Taken together, this study uncovers the identity of MX35 antigen and provides molecular tools for studying its function in normal and cancer tissues.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е0*74*871

Рубрики:

Загальна біологія

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ